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              操作需谨慎,WB实验时需要注意这些!

              发布日期: 2021-10-11
              浏览人气: 66
                WB实验,蛋白质印迹又称免疫印迹,是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。
                
                实验原理:一个基因表达结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此,检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除ELISA法外,也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。
                
                而样本制备是WB实验的开始也是重要的一步,它的操作虽然并不复杂,却有很多需要注意的细节。
                
                根据实验需要的目标蛋白的不同,大致可以分为三种:总蛋白、膜蛋白和核蛋白。总蛋白提取顾名思义就是把组织或细胞内所有的蛋白全都提取出来;膜蛋白、核蛋白提取简单来说就是把细胞膜、细胞核上的蛋白质提取出来。
                
                不同部位的蛋白要能够进行提取分离,需要用到不同的提取试剂,看起来十分麻烦。其中在应用裂解液进行裂解的时候,除了释放出目标蛋白,也同时释放出一些酶,这些酶可能会降解我们的目标蛋白,所以需要对这部分酶进行降解。
                
                WB实验中添加合适的蛋白酶抑制剂(abs9161)或磷酸酶抑制剂(abs9162),全程低温操作,提前预冷PBS(abs961)、裂解液甚至枪头等,从收集细胞开始一直到煮样的全过程都应该尽可能的保持在冰上操作。
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