<p id="xvvzz"></p>

      <ruby id="xvvzz"><mark id="xvvzz"><progress id="xvvzz"></progress></mark></ruby>

        <p id="xvvzz"></p>

          <ruby id="xvvzz"></ruby>
          <p id="xvvzz"></p>

                亚洲人成综合网站7777香蕉
                欢迎光临北京索莱宝科技有限公司网站!
                销售咨询热线:
                13720003930
                产品目录
                您的位置: 网站首页 > 技术文章 > 蛋白酶K的作用及使用方法

                蛋白酶K的作用及使用方法

                发布日期: 2015-11-12
                浏览人气: 1265

                白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,从林伯氏白色念球菌中纯化得到,它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。由于蛋白酶K具有降解天然蛋白质的能力,因此多用于生物样品中蛋白质的一般降解;其消化过程中通常加入EDTA以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用。蛋白酶K的一般工作浓度是50-100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

                蛋白酶K可替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头,实现灭活 RNase A 的目的,也用于处理 RNase-Free的水。充分降解组织或细胞中蛋白质分子,以达到释放和萃取高质量核酸的辅助试剂。用于质?;蚧蜃镈NA、RNA的分离以及蛋白多肽印迹实验。

                值得注意的是,蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.

                白酶K的使用方法

                孵育温度为5565℃,理想孵育温度为58℃;孵育时间为15分钟48小时,理想孵育时间为2小时。

                蛋白酶K的配制

                20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合,加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

                蛋白酶K的保存

                保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效期为12个月。

                分享到: