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              总结实验室常用染色液的制备方法

              发布日期: 2016-04-25
              浏览人气: 1649

              染色液是实验室中常用的试剂之一,分为天然染液和人工染料,也分碱性染料和酸性染料,以下来详细介绍一下实验室常见染色液的配制。
              ⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。 
              配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ; 碘1g 
              先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。 
              ⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是的脂肪染色液。 
              配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉 ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油 
              (2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。 
              (3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 
              ⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。 
              配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml 
              煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。 
              ⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。 
              配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。 
              原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。 
              原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。 
              原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。 
              (原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用) 
              染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,*(若立即用,则着色能力差)。 
              适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。 
              ⒌ 中性红(neutral red)溶液 用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。 
              配方:中性红 ;蒸馏水100ml 
              使用时再稀释10倍左右。 
              ⒍ 曙红Y(伊红,eosin Y)酒精溶液 常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用。 
              配方:曙红 ; 95%酒清100ml 
              也常用于95%酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。 
              ⒎ 钌红(ruthenium red)染液 钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配。 
              配方:钌红5~10mg ; 蒸馏水25-50ml 
              ⒏ 龙胆紫(gentian violet) 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片。 
              配方:龙胆紫0.2~1 g ;蒸馏水100ml 
              ⒐ 苯胺兰(aniline blue)溶液 为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好?;苟嘤糜谟胝媸锖熳魉厝旧?,对于高等植物多用于与番红作双重染色。 
              配方:苯胺兰1 g ; 35%或95%酒精100ml 
              ⒑ (phloroglucin)溶液用于测定木质素。 
              配方:5g ; 95%酒精100ml 
              注:此溶液呈黄褐色即失效。 
              ⒒ 橘红G(orange G)酒精溶液 为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用。 
              配方:橘红G 1g ; 95%酒精100ml 
              ⒓ 番红(safranin O)为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色。 
              配方:(1)番红水溶液番红0.1或1 g ;蒸馏水100ml 
              (2)番红酒精溶液番红0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml 
              (3)苯胺番红酒精染色液 
              甲液 番红5 g +95%酒精50ml 
              乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml 
              将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用。 
              ⒔ 固绿(fast green)又称快绿溶液。为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间。 
              配方:(1)固绿酒精液固绿0.1 g ; 95%酒精100ml 
              (2)苯胺固绿酒精液固绿 1 g ;无水酒精 100ml ;苯胺油 4ml 
              配后充分摇匀,过滤后使用。现配现用效果好。 
              ⒕ 苏木精(hematoxylin)染液苏木精是植物组织制片中应用广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色。配方很多,现举海登汉氏(Heidenhain's)苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液。 
              配方:甲液(媒染剂): 硫酸铁铵(铁明矾)2-4g ;蒸馏水100ml 
              (必须保持新鲜,好临用之前配制) 
              乙液(染色剂):苏木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸馏水 90ml 
              配制步骤:(1)将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存。 
              切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色适度。 
              铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。 
              ⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。 
              取亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成。 
              ⒗詹纳斯绿B(Janus green B)染色液 
              将 绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。 
              ⒘硫堇染色液 
              取克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应。 
              18.黑色素液 
              水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛(福尔马林)??捎米骷阅さ谋尘叭旧?。 
              19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。 
              20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液 
              A液:美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝),95%乙醇30mL; 
              B液:。 
              混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可。 
              21.革兰氏染色液 
              (1)结晶紫(cristal violet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。 
              (2)芦戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水300mL,即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用。 
              (3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 
              (4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸馏水90mL。 
              (5)番红溶液:番红O(safranine O,又称沙黄O),95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。 
              以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌,前者蓝紫色,后者淡红色。 
              22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液;溶液100mL为B液?;旌螦、B液即成。 
              23.姬姆萨(Giemsa)染色液 
              (1)贮存液:称取姬姆萨粉,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用。 
              (2)应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。 
              24. 1%瑞氏(Wright's)染色液 
              称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳。 
              以上就是一些目前实验室中常用染色液的配置方法。

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