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              产品名称:

              凝胶过滤填料DEAE Sepharose Fast Flow琼脂糖凝胶FF

              产品品牌: 索莱宝 价格:
              厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2016-04-06
              凝胶过滤填料DEAE Sepharose Fast Flow琼脂糖凝胶FF
              货号:S8800
              规格:25ml
              琼脂糖凝胶FF是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂,所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上,可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。

              产品概述

              凝胶过滤填料DEAE Sepharose Fast Flow琼脂糖凝胶FF
              货号 :S8800
              规格 :25mL


              产品 简介 :
                 
              琼脂糖凝胶FF是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂,所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上,可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。
                  苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高, 非特异吸附少, 而且填料粒度均匀,所以分离效果好,是纯化丝氨酸蛋白酶类适合的填料。


              亲和填料 特征 :

              特点载量大,分辨率好,流速高,使用方便。
              基质 4%的交联琼脂糖凝胶
              配基苯甲脒
              配基密度7µmol /ml
              吸附载量 13 mg胰蛋白酶/ml
              填料的颗粒大小45-165µm
              大流速300cm/h
              pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
              保存温度+4~8℃
              保存液体20%乙醇


              适用范围 : 
                  一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。


              应用实例: 
              实验名称:苯甲脒琼脂糖凝胶 FF分离尿激酶。


              实验步骤:
                 (1)苯甲脒琼脂糖凝胶 FF装柱,1.6×20m,柱床体积为10ml
                 (2)用缓冲液1平衡2-5个床体积,流速为2ml/min
                 (3)取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中,用0.45µm的滤膜过滤,上样,流速
              为1ml/min
                 (4)用缓冲液1再洗2-5个床体积,流速为2ml/min
                 (5)后缓冲液2进行洗脱,流速为2ml/min,收集洗脱峰,用SDS-PAGE纯化后的效果。
                 (6)用纯水洗5个柱床体积,然后分别用100mM,pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM,pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次,再用纯水洗3个柱床体积,然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体积,流速为2ml/min,柱子置于+4~8℃环境中保存。
                 (7)色谱图见图1,SDS-PAGE结果见图2。 缓冲液组成:
                  缓冲液1:100mM pH7.4的PBS缓冲液;缓冲液2:100mM醋酸缓冲液,pH4.0。


              也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶,例如凝血酶以及胰蛋
              白酶类蛋白酶。例如去除凝血酶上样缓冲液为:50mM pH7.4的PBS缓冲液含0.15M NaCl,洗脱缓冲液为:50mM pH7.4的PBS缓冲液含1M NaCl。


              SDS-PAGE流程:
                 (1)BSA法测量样品蛋白浓度;
                 (2)根据测定样品的蛋白浓度,算出5-10µg/孔所需的体积;
                 (3)向1.5ml EP管中加入含5-10µg蛋白的样品溶液,若体积小于10µL,则加20mM PBSpH7.4补足10µl;若体积大于10µl,则要加入1ml无水乙醇,-20℃下浓缩1h;
                 (4)取浓缩样品10000rpm离心15min,除去上清,37℃烘箱10min去除残余的乙醇;
                 (5)在样品加入20mM PBS pH7.4和2×loading buffer各10µl,100℃下10min。取出后用冷却30s,4000rpm离心1s;
                 (6)点样,电泳。


              应用的注意事项 :
                 1  色谱柱装填
                 1、所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体好做脱气处理。
                 2、在柱子下端加入蒸馏水,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的
              蒸馏水。
                 3、将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产
              生,让填料先自然沉降。
                 4、柱压不超过0.3MPa,如果装柱系统中无法测柱压,则控制流速高于300cm/h,但是在使用中一般只用大流速的75%。
                 2  蛋白的结合
                 平衡缓冲液可以采用如下配方:100mM pH7.4的PBS缓冲液,0.1M NaCl,pH8.0。上样完毕后,继续用平衡缓冲液洗柱子,直到基线平稳。
                 3  蛋白的洗脱
                (1)洗脱可以采取特异性或者非特异性洗脱。
                (2)特异性洗脱可以用目标分子的竞争剂,对氨基苯甲脒的抑制剂。对非特异性洗脱
              而言,可以选用以下几种方法:
                 a 改变离子强度,通常加入1M的NaCl,必要的话可以采用阶段洗脱或线性梯度洗脱。
                 b 改变pH,可采用阶段洗脱洗脱或线性梯度洗脱来达到目的。
                 c 降低洗脱缓冲液的极性。如可以在洗脱缓冲液中加入10%的二氧六环等。
                 d 使用变性剂。如在洗脱缓冲液中加入尿素、盐酸胍等。


              再生、清洗: 
              1  再生
                 用纯水洗5个柱床体积,然后分别用100mM,pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和
              100mM,pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次,再用水洗3个柱床体积,然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体积,流速为2ml/min,柱子置于+4~8℃环境中。
                 如果在色谱操作过程中用到了变性剂或者去污剂,也可以用上述方法洗柱子。
              2  清洗
                 在应用中,柱子上结合的一些物质如变性蛋白和脂质等不能通过再生过程去除,这种
              情况下,可以用去污剂如0.1%Triton X-100在37℃洗柱子1min。之后立即用5个床体积的平衡液洗柱子。


              保存: 
                  在20%乙醇中,4℃下长期保存。


              特别注意 :
                  上样之前 , 样品必须去除色素 , 否则色素会被吸附到填料上 , 影响填料的正常使用

               

              凝胶过滤填料DEAE Sepharose Fast Flow琼脂糖凝胶FF订购说明:

              1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
              2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
              3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
              4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
              5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


              运输说明:

              1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
              2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
              3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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