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              • 亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)
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              产品名称:

              亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)

              产品品牌: 索莱宝 价格:
              厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2016-04-05
              亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)
              货号 :R8300
              规格 :5ml
              保存 :2-8℃
              Protein G 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白, 主要通过 Fc 片段结合哺乳动物IgG,但是不与狗 lgG 结合,不结合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 与蛋白 G 不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样

              产品概述

              亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)
              货号 :R8300
              规格 :5ml
              保存 :2-8℃


              产品 介绍 :
                   Protein G 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白, 主要通过 Fc 片段结合哺乳动物IgG,但是不与狗 lgG 结合,不结合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 与蛋白 G 不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样,具体见表。天然 Protein A 有五个 IgG 结合区域和一些未知功能的区域,重组 protein A 去除了与白蛋白及细胞表面结合位点,只含有五个 IgG 结合区域,减少了非特异性吸附。


              rProtein G Beads  产品性能 :

              指标 性能
              基质4%琼脂糖微球
              配体重组蛋白 A
              载量 >4  0mg 人 I  gG/ml 介质
              粒径(µm)  45- 165
              大流速0.1 MPa, 1 bar
               pH 稳定范围 3-12
              储存缓冲液20% 乙醇
              储存温度2°C-8°C


                Protein A  和   Protein G  对不同抗体的结合能力   :

              种属 亚型Protein A  Protein G
              HumanIgA varible— 
              HumanIgD— — 
              HumanIgE— — 
              HumanIgG1++++++++
              HumanIgG2++++++++
              HumanIgG3— ++++
              HumanIgG4++++++++
              HumanIgM varible— 
              Avian egg yolkIgY— — 
              Cow  ++ ++++
              Dog  ++++++ 
              Goat —  ++++
              Guinea pigIgG1++++  ++
              Guinea pigIgG2++++  ++
              Hamster +++
              HorseTotal IgG    ++++++
              Koala — +
              Liama — +
              Monkey(rhesus) ++++++++
              MouseIgG1+++++
              MouseIgG2a ++++++++
              MouseIgG2b ++++++
              MouseIgG3+++++
              MouseIgMvariable
              Pig +++ +++ 
              Rabbit Total IgG+++++++ 
              RatIgG1+
              RatIgG2a++++
              RatIgG2b++
              RatIgG3+++
              Sheep Total IgG  +/- ++


              ++++=结合能力强;  ++=结合能力中等;  —=结合能力弱或没有结合 


              纯化流程 :
              1 、Buffer  的准备

              所用水和 Buffer 在使用之前建议用  0.22µm 或 0.45 µm 滤膜过滤。 
              结合/ 洗杂  Buffer:   0.15M NaCl,  20 mM Na 2 HPO 4 ,  pH 7.0
              洗脱  Buffer: 0.1M 甘氨酸,  pH 3.0
              中和液:   1M Tris-HCl, pH8.5


              2 、 样品准备
                   上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值, 可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。
                   样品在上样前建议离心或用  0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 
              3 、 样品纯化
                  1) 将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱,层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到?;さ鞍椎淖饔?。 
                  2) 将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中(保证目的蛋白与 rProtein A Beads 充分接触,提高目的蛋白的回收率) ,收集流出液。 
                  3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。    

                  4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱  Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。 
                  5) 依次使用 3 倍柱体积的结合  Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,后再用 5 倍柱 体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4 度保存,防止填料被细菌污染。

              
              4 、   SDS-PAGE  检测
                  将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。 

               

              填料清洗
                  rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生, 但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。
              去除一些沉淀或变性物质用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的   PBS, pH 7.4 清洗。
                  去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
                  用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton  X-100 清洗,然后然后立即用 5倍柱体积的   PBS, pH 7.4 清洗。 


              问题及解决方案

               原因分析推荐解决方案
              柱子反压过高筛板被堵塞清洗或更换筛板
              柱子反压过高填料被堵塞 按照填料清洗部分进行树脂清洗
              柱子反压过高填料被堵塞裂解液中含有微小的固体颗粒, 建议上柱
              前使用滤膜    (0.22 or 0.45 µm) 过滤, 或
              者离心去除。
              去除样品或柱子中的气泡  样品纯化过程中曲线不稳样品或 buffer 中有气泡去除样品或柱子中的气泡
              去除样品或柱子中的气泡  样品纯化过程中曲线不稳样品或 buffer 中有气泡样品和 buffer 进行脱气
              洗脱组分中没有目的蛋白 样品中抗体浓度太低使用其抗原做配体的介质
               抗体被降解适当的提高洗脱 pH
              回收率逐渐减低上样量太多 减少上样量
              回收率逐渐减低柱子太脏,载量降低按照填料清洗部分进行树脂清洗

               

              亲和层析填料 rProtein G Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)订购说明:

              1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
              2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
              3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
              4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
              5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


              运输说明:

              1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
              2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
              3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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