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              • 蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂(GST Resin)
              产品名称:

              蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂(GST Resin)

              产品品牌: 索莱宝 价格:
              厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2016-04-12
              蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂(GST Resin)
              货号 :P2020
              规 格 :5ml/10ml
              保存 :4℃保存,有效期少一年
              产品简介 :
              pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合, 因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。

              产品概述

              蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂(GST Resin)
              货号 :P2020
              规 格 :5ml/10ml
              保存 :4℃保存,有效期少一年


              产品简介 :
                  pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合, 因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。
                  GSTs 是一类以谷胱甘肽(γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)作为底物,通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的,因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对 GST 及其融合蛋白的纯化效率很高??梢杂煤卫牍入赘孰牡幕撼逡合赐呀岷?GST 融合蛋白。树脂用 3mol/L NaCl 的缓冲液再生。
                  谷胱甘肽琼脂糖对 GST 融合蛋白的结合能力很强(每毫升柱床体积的树脂能结合 8 毫克融合蛋白) 。

               

              特性:
              粒度:45-165um 流速:75cm/h
              工作 PH:4-10 耐压:0.3Mpa
              载量:>5mg 谷胱甘肽 S-转移酶


              使用说明 :
              谷胱甘肽树脂的处理:
                  1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器,将树脂混成匀浆。
                  2.取部分匀浆放入 15ml 聚丙烯管(每 100ml 细菌培养物大约需要 2ml 匀浆) 。
                  3.4℃ 500 g 离心 5 分钟,小心去掉上清。
                  4.在树脂中加入 10 倍柱床体积预冷的 PBS,颠倒数次混匀,4℃ 500 g 离心 5 分钟,小心去掉上清。
                  5.每毫升树脂加入 1 毫升冷的 PBS,制成 50%匀浆,颠倒数次,混合均匀,悬液冰上放置待用。


              制备细胞抽提物 :
                  6.每 100 毫升培养物的细胞沉淀重悬于 4mlPBS 缓冲液中。
                  7.加入溶菌酶终浓度为 1mg/ml,冰上放置 30 分钟。
                  8.用针筒将 10ml 浓度为 0.2%的 TritonX-100 强行注入黏稠的细胞裂解物中,剧烈振动数次混匀。加入DNase 和 RNase 终浓度 5ug/ml, 4℃振动温育 10 分钟,4℃ 3000 g 离心 30 分钟,去除不溶性细胞碎片,上清转移到一只新管中,加入 DTT 终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白:
                  9.细胞裂解物与适量 50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和,每 100 毫升细菌培养物加 2ml 树脂,于室温轻摇 30min。
                  10.混合物于 4℃以 500 g 离心 5 分钟,小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。
                  11.沉淀中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS,颠倒离心管数次混匀,洗去未与树脂结合的蛋白。
                  12.4℃以 500 g 离心 5 分钟,小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。
                  13.重复步骤 11 和 12 两次。
                  14.结合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱, 也可用凝血酶、 肠激酶或 Xa 因子切割, 释放靶蛋白。用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 :
                  a.沉淀中加入 1 倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液,室温轻轻搅动 10min,洗脱树脂上结合的蛋白。
                  b. 4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清(含洗脱的融合蛋白)移新管中。
                  c.重复步骤 a 和 b 两次,合并 3 次上清。


              蛋白酶解从结合的 GST  融合蛋白上回收靶蛋白 :
                  a.  在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或 Xa 因子(根据融合蛋白中的位点选择) ,每 ml树脂加入 50 单位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡 2—16 小时。用小规模实验确定时间。
                  b.4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清小心移新管中。 (GST 仍结合在树脂上,而靶蛋白在上清中,蛋白酶也在上清中,仍需要分离)
                 15.10% SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。


              试剂配制:
              谷胱甘肽洗脱缓冲液:10mmol/L 还原型谷胱甘肽,50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)


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              蛋白质纯化试剂GST标签纯化树脂(GST Resin)产品订购说明:

              1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
              2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
              3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
              4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
              5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

               

              运输说明:

              1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
              2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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