结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒

结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒

货号：BC3290
规格：50管/48样/25管/24样

产品内容：

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每支加入7mL试剂一。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入5mL试剂一。

试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入8mL试剂一。

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；

试剂七：液体250μL×1支，-20℃保存；

试剂八：液体12.5μL×1瓶；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四

反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入7mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

测定意义
    GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。

测定原理
    GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

需自备的的仪器和用品
    紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液制备

    称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。

二、测定步骤

混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

三、GBSS活性计算

1、按样本蛋白浓度计算：

    单位的定义：每mg组织蛋白在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

    GBSS活性（U/mg prot）＝ΔA×（V反应体系÷1mL）÷T÷ε÷d÷（Cpr×V样本×V上清÷（V样本+V试剂二+V试剂三））=432×ΔA÷Cpr。

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

    单位的定义：每g组织在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

    GBSS活性（U/g 鲜重）=ΔA×（V反应体系÷1mL）÷T÷ε÷d÷（W×V样本÷V提取×V上清÷（V样本+V试剂二+V试剂三））=432×ΔA÷W。

    V反应体系：终反应体系体积，0.78mL；1mL：1mL反应体系；T：反应时间，2min；6.22×10^-3：ε：NADPH消光系数，6.22×10^-3mL/(nmol_˙cm)；d：光径，1cm；V样本：加入样本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；V试剂二：加入试剂二的量，0.27mL；V试剂三：加入的试剂三的量，0.15mL；Cpr：样本蛋白浓度；W：样本鲜重。

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运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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