α-淀粉酶检测试剂盒

α-淀粉酶检测试剂盒
货号：BC0610
规格：50管/24样
测试方法：可见分光光度法

测定意义
    淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

测定原理
    还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。

需自备的仪器和用品
    可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

操作步骤

一、 粗酶液提?。?/strong>
     称取约 0.1g 样本，加 0.8mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1次，使其充分提??；6000g，常温离心 10min，吸取上清液并加蒸馏水定容 10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
二、测定 步骤和加样表：
1、分光光度计或者酶标仪预热 30min 以上，调节波长 540nm。
2、将葡萄糖用蒸馏水稀释为 0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 和 0.0039 mg/mL 的标准溶液。
3、按操作表依次加入各试剂：
试剂（μL）  对照管  测定管  标准管  空白管
α-淀粉酶原液  250  250  -  -
蒸馏水  -  -  -  250
标 准 溶 液
（mg/mL）
-  -  250  -
70℃水浴 15min 左右，冷却

试剂一  500  -  -  -
将以上对照管、测定管和试剂二置于 40℃恒温水浴中保温 10min 左右
试剂二  250  250  250  250
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min
试剂一  -  500  500  500
混匀，90℃水浴 10min，蒸馏水调零，540nm 处读取对照管、测定管、标准管、空白管吸光度，分别记为 A 对照、A 测定、A 标准和 A 空白，计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A空白。

三、α- 淀粉酶活性计算：
1、标准曲线的绘制
以 ΔA 标准为 y 轴，以标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将
ΔA 测定带入方程得到 x（mg/mL）。
2、α-淀粉酶活性的计算
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷（V 样×Cpr）÷T==0.2×x÷Cpr
（3）血清（浆）样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL；Cpr：样本蛋白
质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

注意事项：
当测定的吸光值大于 1 时，可以对样本进行适当稀释后测定。

α-淀粉酶检测试剂盒订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

α-淀粉酶检测试剂盒运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。