货号 | BC0615 | 规格 | 100管/48样 |
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供货周期 | 现货 | 主要用途 | α-淀粉酶活性测定 |
α-淀粉酶 (AMS) 检测试剂盒 微量法
货号:BC0615
规格:100T/48S
产品内容
试剂一:液体 20mL×1 瓶,室温保存。若有黄色晶体析出,可适当加热溶解后再用。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 10mL 蒸馏水,置于常温水中并加热煮沸,期间不断搅拌粉剂溶解。
标准品:粉剂×1 支,10mg 无水葡萄糖。
产品说明:
淀粉水解酶,包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中 α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在 540nm 有吸收峰;通过测定 540 nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL 耐热,但是 β-淀粉酶可在 70℃钝化 15min。因此粗酶液经过 70℃钝化 15min,就只有 α-AL 能够催化淀粉水解。
需自备实验用品:
酶标仪或分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96 孔板/微量比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤
一、 粗酶液提?。?br />称取约 0.1g 样本,加 0.8 mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取 15min,每隔 5min 振荡 1次,使其充分提??;6000g,室温离心 10min,吸取上清液并且加蒸馏水定容 10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
二、测定 步骤和加样表(在 EP 管中依次加入下列试剂):
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2、将葡萄糖标准液稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 和 0.0039mg/mL的标准溶液。
3、按操作表依次加入各试剂:
试剂(μL) 对照管 测定管 标准管 空白管
α-淀粉酶原液 75 75 - -
蒸馏水 - - - 75
标 准 溶 液
(mg/mL)
- - 75 -
70℃水浴 15min 左右,冷却
试剂一 150 - - -
将以上对照管、测定管和试剂二置于 40℃恒温水浴中保温 10min 左右
试剂二 75 75 75 75
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min
试剂一 - 150 150 150
混匀,90℃ 水浴 10min,取 200μL 96 孔板或微量比色皿中,540nm 处读取对照管、测定管、标准管、空白管的吸光度,分别记为 A 对照、A 测定、A 标准和 A 空白,计算 ΔA 测定=A 测定-A对照,ΔA 标准=A 标准-A 空白。
三、α- 淀粉酶活性计算:
1、标准曲线的绘制
以 ΔA 标准为 y 轴,以标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将 ΔA 测定带入方程得到 x(mg/mL)。
2、α-淀粉酶活性的计算
(1)按照样本质量计算
单位定义:每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷(V 样×Cpr)÷T==0.2×x÷Cpr
(3)血清(浆)样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义:每ml血清(浆)每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋
白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
当测定的吸光值大于 1.5 时,可以对样本进行适当稀释后测定。
α-淀粉酶 (AMS) 检测试剂盒 微量法订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
α-淀粉酶 (AMS) 检测试剂盒 微量法运输说明:
极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。