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                • α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
                产品名称:

                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法

                产品品牌: 索莱宝 价格:
                厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2020-08-13
                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法:α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
                α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

                产品概述

                品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0715
                规格100管/96样供货周期现货
                主要用途α-KGDH酶活测定应用领域生物产业

                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法

                货号:BC0715

                规格:100T/96S

                产品内容:

                试剂一:液体110mL×1瓶,4℃保存;

                试剂二:液体1mL×1支,-20℃保存;

                试剂三:液体22mL×1瓶,4℃保存;

                试剂四:粉剂×1支,4℃保存;

                试剂五:粉剂×1支,4℃保存;

                试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;

                试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;

                试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入0.8mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。

                 

                工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。

                 

                产品说明:

                    α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

                    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

                 

                需自备的仪器和用品

                     紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

                 

                操作步骤:

                一、α-KGDH的提取

                     称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。

                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法

                二、测定步骤

                • 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长340nm,蒸馏水调零。

                2. 空白管:

                取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL试剂八和12μL蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。

                3.测定管:

                取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL试剂八和12μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。

                 

                三、α-KGDH活性计算

                a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

                (1)按样本蛋白浓度计算

                单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

                 α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

                (2)按样本鲜重计算:

                单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

                 α-KGDH(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

                (3)按细菌或细胞密度计算:

                单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

                α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=2.977×(ΔA测定-ΔA空白)

                V反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.012 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

                 

                b.96孔板测定的计算公式如下

                (1)按样本蛋白浓度计算:

                单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

                α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=2456.2×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

                (2)按样本鲜重计算:

                单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

                α-KGDH活性(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=2480.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

                (3)按细菌或细胞密度计算:

                单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。

                α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=4.962×(ΔA测定-ΔA空白)

                V反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm;V样:加入样本体积,0.012 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

                 

                注意事项

                • 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性和失活。
                • 比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
                • 两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
                • 测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。

                ?相关文献:

                《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
                 期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
                《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
                 

                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法订购说明:

                1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
                2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
                3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
                4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
                5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


                α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法

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                极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
                低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
                常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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